實(shí)驗時怎樣才能挑選到適合自己試驗的抗體
更新時間:2023-05-11 點(diǎn)擊次數(shù):849
關(guān)于特異性的選擇:特異性的選擇首要需求考慮四個方面:蛋白特異性、實(shí)驗方法特異性、符號物的特異性、種屬特異性。
1、蛋白特異性:針對需求檢測的蛋白查找抗體,幾個細(xì)節(jié)要差異,重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,對抗體的要求是不相同的,留心檢查抗體闡明書的檢測闡明。假定重組蛋白不是全長表達(dá),則需求留心抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。
2、符號物的特異性一般根據(jù)實(shí)驗操作的實(shí)驗方法不會運(yùn)用帶有符號的一抗,比方WB、IHC等,都是通過二抗類的試劑符號抵達(dá)效果出現(xiàn)的目的。
可是根據(jù)儀器剖析的一些實(shí)驗,或許就會運(yùn)用到直接符號的一抗,比方流式實(shí)驗。那么需求了解到自己行將運(yùn)用的儀器能檢測到的熒光規(guī)模,不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的符號物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗中,需求選配不同的熒光物。
3、實(shí)驗方法特異性:現(xiàn)在運(yùn)用抗體的實(shí)驗方法有許多,不同的運(yùn)用方法過程中,由于對蛋白樣品的處理方法不相同,蛋白的含量有差異,對抗體的辨認(rèn)表位和效價要求都是不相同的。具體的根據(jù)闡明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。
4、種屬特異性:同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異?,F(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)作穿插反應(yīng)。需求參照闡明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,能夠通過蛋白的序列比對,選擇同源序列免疫的抗體。